人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E

產(chǎn)品名稱:人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E

人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E收到貨后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基）

人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E培養(yǎng)步驟

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

三、細(xì)胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請參考我司貨號：C7001）

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃

人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系Plat-E部分產(chǎn)品：

YS3461CCRFS180II小鼠肉瘤成纖維細(xì)胞CCRFS180II

YS3462351小鼠雜交瘤細(xì)胞抗CD235.1

YS3463FreestyleCHOS中國倉鼠卵巢細(xì)胞Freestyle CHO-S

YS3464SH2小鼠B淋巴細(xì)胞白血病SH2

YS3465H1Hela人宮頸癌細(xì)胞H1 Hela

YS3466IPECJ2豬正常的腸上皮細(xì)胞IPEC-J2

YS3467CHO/DHFR中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO/DHFR

YS3468MEL（MEL745AclDS19）小鼠紅白血病細(xì)胞MEL（MEL-745A cl. DS19）

YS3469JAWSⅡ小鼠骨髓（未成熟）樹突狀細(xì)胞JAWSⅡ

YS3470ZFL斑馬魚肝臟組織細(xì)胞ZFL

YS3471GM12882人B淋巴細(xì)胞GM12882

YS3472GM01176人成纖維細(xì)胞GM01176

YS3473GM50142人B淋巴細(xì)胞GM50142

YS3474GM50113人B淋巴細(xì)胞GM50113

YS3475GM11404人B淋巴細(xì)胞GM11404

YS3476GM23465人B淋巴細(xì)胞GM23465

YS3477GM01359人成纖維細(xì)胞GM01359

YS3478AG09802人B淋巴細(xì)胞AG09802

YS3479GM21833人B淋巴細(xì)胞GM21833

YS3480VK2/E6E7人陰道粘膜上皮細(xì)胞VK2/E6E7

YS3481GM02008人成纖維細(xì)胞GM02008

YS3482GM11115人成纖維細(xì)胞GM11115

YS3483GM13325人成纖維細(xì)胞GM13325

YS3484GM09326人成纖維細(xì)胞GM09326

YS3485GM00526人成纖維細(xì)胞GM00526

YS3486GM50152人B淋巴細(xì)胞GM50152

YS3487H197/IGFIR褐家鼠腦海馬體成纖維細(xì)胞H19-7/IGF-IR

YS3490EO771小鼠髓樣乳腺癌貼壁細(xì)胞EO771

YS3491GM03606唐氏綜合癥背景羊水來源細(xì)胞GM03606

YS3492BB71小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞BB7.1

YS3493BBM1小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞BBM.1

YS3494L243小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞L243

YS34954.00E+11小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞4E11

YS3496BB77小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞BB7.7

YS3497IGG6A6小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞IGG-6A6

YS349893F10小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細(xì)胞9.3F10

YS3499NEGFP4C小鼠神經(jīng)干細(xì)胞NE-GFP-4C

YS3500GM00325人成纖維細(xì)胞GM00325

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